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生物透射(掃描)電鏡固定液

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

生物透射(掃描)電鏡固定液
生物透射電鏡服務(wù)以及生物樣品掃描電鏡都需要光學(xué)透鏡的焦點是固定的,而電子透鏡的焦點可以被調(diào)節(jié),因此電子顯微鏡不像光學(xué)顯微鏡那樣有可以移動的透鏡系統(tǒng)。現(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡,由很穩(wěn)定的直流勵磁電流通過帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場使電子聚焦。

生物透射(掃描)電鏡固定液

生物透射電鏡服務(wù)以及生物樣品掃描電鏡都需要光學(xué)透鏡的焦點是固定的,而電子透鏡的焦點可以被調(diào)節(jié),因此電子顯微鏡不像光學(xué)顯微鏡那樣有可以移動的透鏡系統(tǒng)。現(xiàn)代電子顯微鏡大多采用電磁透鏡,由很穩(wěn)定的直流勵磁電流通過帶極靴的線圈產(chǎn)生的強(qiáng)磁場使電子聚焦。電子源是一個釋放自由電子的陰極,柵極,一個環(huán)狀加速電子的陽極構(gòu)成的。由于光學(xué)顯微鏡分辨率的限制,蟲體表面細(xì)節(jié)很難在光鏡下觀察清楚,給線蟲分類帶來了較大困難。

  電鏡技術(shù)包含掃描電鏡(scanning electron microscopy,SEM)以及透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)。掃描電子顯微鏡,簡稱為掃描電鏡,是用細(xì)聚焦的電子束轟擊樣品表面,通過電子與樣品相互作用產(chǎn)生的二次電子、背散射電子等對樣品表面或斷口形貌進(jìn)行觀察和分析。SEM已廣泛應(yīng)用于材料、冶金、礦物、生物學(xué)等領(lǐng)域。透射電鏡:是以波長極短的電子束作為照明源,用電磁透鏡聚焦成像的一種具有高分辨本領(lǐng)、高放大倍數(shù)的電子光學(xué)儀器,主要應(yīng)用于物質(zhì)內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)觀察。
  樣品掃描電鏡透射電鏡固定液介紹:
  固定的目的是盡可能使細(xì)胞中的各種細(xì)胞器以及大分子結(jié)構(gòu)保持生活狀態(tài),并且牢固地固定在它們原來所在的位置上。固定的方法有物理的和化學(xué)的兩大類。物理的方法系采用冰凍、干燥等手段來保持細(xì)胞結(jié)構(gòu);化學(xué)的方法是用一定的化學(xué)試劑來固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。現(xiàn)通常使用化學(xué)方法對組織或細(xì)胞進(jìn)行固定。
  生物透射(掃描)電鏡固定液是常用固定劑:
  1、是一種強(qiáng)氧化劑,與氮原子有較強(qiáng)的親和力,因而對于細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)成分有良好的固定作用。它還能與不飽和脂肪酸反應(yīng)使脂肪得以固定。此外,還能固定脂蛋白,使生物膜結(jié)構(gòu)的主要成分磷脂蛋白穩(wěn)定。它還能與變性DNA以及核蛋白反應(yīng),但不能固定天然DNA、RNA及糖原。固定劑有強(qiáng)烈的電子染色作用,用它固定的樣品圖象反差較好。固定的時間一般為1-2小時。
  2.戊二醛(glutaraldehyde
  C5H8O2),戊二醛的優(yōu)點是對糖原、糖蛋白、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞基質(zhì)等有較好的固定作用,對組織和細(xì)胞的穿透力比強(qiáng),還能保存某些酶的活力,長時間的固定(幾周甚至1~2個月)不會使組織變脆。缺點是不能保存脂肪,沒有電子染色作用,對細(xì)胞膜的顯示較差。
  組織塊固定常規(guī)采用戊二醛—雙重固定法。分預(yù)固定和后固定,中間用磷酸緩沖液漂洗。前固定用2.5%戊二醛固定2小時以上、后固定用1%固定液固定1~2小時,pH7.3~7.4。
  固定完畢,用緩沖液漂洗20分鐘后進(jìn)行脫水。

 

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